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CLISA,上海良润研发成功单分子免疫技术
发布时间:2023-07-10

CRISPR/Cas13a具有RNA引导的RNA切割能力,RNA引导反式核酸内切酶活性是高度特异的,高效切割ssRNA,每个激活Cas13a蛋白可以识别10拷贝RNA。CRISPR/Cas13a强大信号放大能力使RNA检测灵敏度能够降低到飞摩尔(10-15M)水平。


1、CLISA检测原理

CLISA(CRISPR/Cas signal amplification Linked ImmunoSorbent Assay)是CRISPR-based单分子免疫诊断技术平台灵敏度达fM或fg/mL,高于ELISA 1,000倍,精准分析多种疾病的超低浓度生物标志物


结合“三明治结构”免疫结合机制,用含有T7启动子序列生物素化双链DNA(dsDNA)取代酶放大体系。T7聚合酶识别启动子序列进行转录,产生大量单链RNA分子拷贝。crRNA识别转录RNA分子导致CRISPR/Cas13反式切割活性激活。两端荧光团和猝灭基团标记的短ssRNA报告探针通过反式切割活性被切割。

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相较ELISA免疫检测方法,CLISA利用T7转录放大分子数,CRISPR剪切放大信号,灵敏度提升1,000倍,检测限达fg/mL。

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      2、主要试剂组分

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3、试剂盒检测性能

 反应时间3小时  (免疫反应0.5小时,转录反应1小时,Cas荧光信号检测0.5小时。)

 线性范围50fg/mL~5ng/mL

 最低检测限10fg/mL

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4. 开发产品线

       CLISA主要用于开发fmol或fg/mL浓度的蛋白标志物临床诊断产品。

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